tunel中pod全称（pod全称英语）

细胞凋亡检测实验之《TUNEL染色》

1、TUNEL染色，即原位末端转移酶标记技术，是一种用于检测细胞凋亡的常用方法。其原理基于凋亡细胞的DNA双链断裂或一条链出现缺口，产生一系列3’-OH末端。在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，可以将脱氧核糖核苷酸和生物素所形成的衍生物标记到DNA的3′末端，从而实现对凋亡细胞的检测。

2、TUNEL图像：显示被TUNEL检测液标记的凋亡细胞，这些细胞会发出绿色荧光（或其他选定颜色的荧光）。DAPI图像：显示所有细胞核，无论是否凋亡，都会发出蓝色荧光。DAPI用于细胞核的染色，便于观察细胞形态和数量。

3、细胞凋亡（TUNEL，TUNEL染色）检测技术简介 细胞凋亡是指为维持内环境稳定，生物体内细胞在特定的内源或外源信号诱导下，其死亡途径被激活，并在有关基因的调控下发生的程序性死亡过程。细胞凋亡是程序性死亡过程的一种主要形式，涉及一系列复杂的生物学现象和分子生物学机制。

4、TUNEL法，即脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法，是一种用于检测细胞凋亡的常用技术。该方法基于细胞凋亡时DNA双链或单链断裂产生的3-OH末端，利用脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）将标记有生物素（或荧光素等）的脱氧核糖核苷酸结合至这些末端，再通过一系列反应使凋亡细胞被特异性地显示出来。

5、TUNEL染色步骤：首先，脱蜡至水，然后用蛋白酶K在37°C下孵育15~30分钟，去除细胞内蛋白，注意要彻底洗涤干净。接着，加入TUNEL检测液，避光在37°C下孵育60分钟。之后，用DAPI工作液滴加，10分钟后流水冲洗5分钟。最后，进行脱水、透明和封片步骤。

6、TUNEL（terminal Deoxynucleotidyl Transferase dUTP Nick end Labeling）法是一种常用的检测细胞凋亡的方法，其原理是通过标记细胞核内断裂的DNA末端来识别凋亡细胞。以下是TUNEL法检测细胞凋亡的详细实验指南及进阶技巧。

tunel法荧光和显色法原理的区别

用PBS溶液对样本进行两次漂洗。 制备TUNEL反应混合液：将50微升TdT与450微升荧光素标记的dUTP溶液混合均匀。对于阴性对照组，仅加入50微升荧光素标记的dUTP溶液；对于阳性对照组，先加入100微升DNASe 1，然后在室温至37°C的条件下反应10至30分钟，后续步骤与处理组相同。

白光法：原理类似荧光法，但在DNA断裂处掺入的是生物素标记的dUTP，随后用HRP标记的链霉亲和素检测，最后通过DAB显色反应，使凋亡细胞的细胞核呈棕黄色。实验前准备 确认材料：确保试剂盒包含TdT酶、Tunel反应液（荧光或白光标记）、HRP二抗（白光试剂盒）等。

标记反应：在TdT的作用下，将标记有生物素（或其他标记物）的脱氧核糖核苷酸结合至DNA的3-OH末端。显色反应：借助辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉卵白素与dNTP上的生物素结合，再通过相应的底物（如DAB、过氧化氢）产生颜色反应，使凋亡细胞被特异性地显示出来。

TUNEL实验中几个关键步骤是什么?

1、脱蜡和水化是TUNEL实验中的首要步骤，它能够去除切片中的脂溶性物质，为后续步骤做好准备。通常，可以使用60度的酒精脱蜡20分钟，随后用二甲苯处理5到10分钟，以去除残留的蜡。水化则通过使用不同浓度的乙醇溶液（从高到低）进行，以确保样本完全水合。 细胞通透性的调控对于TUNEL实验至关重要。

2、PBS的充分清洗。我个人认为，在TUNEL反应后和酶标反应后的清洗应十分严格，可增加次数达5次，因为这些清洗直接决定最后切片的非特异性着色。 此外，内源性Pod的封闭也十分关键。

3、TUNEL染色利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）将荧光标记的dUTP添加到这些3-OH末端，从而在荧光显微镜下观察到荧光信号，这些信号即表示DNA断裂的位置，从而可以检测凋亡细胞的存在。

4、预平衡：将样本置于平衡液中，为后续的标记反应做准备。标记断裂的DNA链：在TdT酶的作用下，用荧光素12-dUTP标记断裂的DNA链。这一步是TUNEL染色的核心步骤，能够特异性地标记凋亡细胞的DNA断裂末端。终止反应：使用终止液终止标记反应，防止非特异性标记。洗涤：再次洗涤样本，去除未结合的标记试剂。

5、样品固定和透化是TUNEL检测的关键步骤，需要严格控制条件以避免假阳性或假阴性结果。使用具有阳性和阴性凋亡控制样品的TUNEL检测标准化可以减轻潜在的影响，并提高结果的准确性。在选择标记策略和检测方法时，需要根据实验目的和样品类型进行综合考虑。

6、TUNEL法检测细胞凋亡的实验进阶指南如下：实验原理：核心步骤：基于细胞膜通透性的增加，rTDT和生物标记的DTUTP进入细胞，与断裂的DNA 3OH结合，再通过HRP标记的链霉亲和素与biotin结合，最终通过DAB显色呈现棕褐色，以此评估细胞凋亡。关键步骤与注意事项：脱蜡与水化：确保充分，以保证反应均匀进行。